기초 분자생물학 실험서 - 유전자 재조합 전과정

기초 분자생물학 실험서 전체 흐름도 XII



1부 분자생물학 실험의 기초 3

실험 1A ‌기초 분자생물학 실험 시 주의사항 및 보고서 작성 5

1. 이론적 배경 5

실험 1A 흐름도 ‌ 기초 분자생물학 실험 시 주의사항 및 보고서 작성 6~7

2. 기기 및 도구 8

3. 실험 과정 8

4. 실험상 일반적인 주의사항 8

5. ‌분자생물학 실험에 사용되는 세균 및 기타 생물을 다룰 때의 주의사항 10

6. 열원, 열기구 및 전원을 사용할 때 주의사항 11

7. 유리기구를 사용할 때 주의사항 13

8. 화학약품을 사용할 때 주의사항 14

9. 실험 사고 발생 시 응급조치 요령 15

10. 실험실 안전주의 표시 16

11. 실험 보고서 작성의 기본요령 17

12. 결과 18

13. 참고 문헌 및 웹 사이트 18



실험 1B ‌기초 분자생물학 실험에 사용되는 도구 및 기기 사용법 19

1. 이론적 배경 19

실험 1B 흐름도 ‌기초 분자생물학 실험에 필요한 도구 및 기기 사용법 20~21

2. 기기 및 도구 22

3. 실험 과정 22

4. 결과 46

5. 참고 문헌 및 웹 사이트 46

실험 2 ‌기초 분자생물학 실험에 필요한 용액 및 배지 제조 51

1. 이론적 배경 51

실험 2 흐름도 ‌기초 분자생물학 실험에 필요한 용액 및 배지 제조 52~53

2. 재료 및 기구 54

3. 기본 시약 만들기 54

4. 세균 배양 배지 만들기 58

5. 결과 59

6. 참고 사항 60

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 60



2부 반응능 세포 만들기와 형질전환 효능 측정 65

1. 유전자 재조합 기술 66

2. 반응능 세포 67

3. 플라스미드 DNA와 클로닝 벡터 67

4. 항생제 및 항생제 저항성 유전자와 그 산물 69



실험 3 ‌반응능 세포(competent cell) 만들기 71

1. 이론적 배경 71

실험 3 흐름도 ‌반응능 세포(competent cell) 만들기 72~73

2. 재료 및 기구 74

3. 실험 과정 74

4. 결과 76

5. 더 알아보기 76

6. 참고사항 76

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 77



실험 3S ‌반응능 세포(competent cell)를 만드는 간단한 방법 83

실험 과정 83

실험 3S 흐름도 ‌대체 실험 3S: 반응능 세포를 만드는 간편한 방법 84~85



실험 4 ‌제작한 반응능 세포의 형질전환 효능 측정 86

1. 이론적 배경 86

실험 4 흐름도 ‌제작한 반응능 세포의 형질전환 효능 측정 88~89

2. 재료 및 기구 90

3. 실험 과정 90

4. 결과 92

5. 더 알아보기 93

6. 참고사항 93

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 94



3부 플라스미드 DNA 정제와 재조합 DNA 제작 99

1. 유전자 재조합 실험 과정 100

2. 플라스미드 DNA의 정제 100

3. 플라스미드 DNA의 전기영동 확인 102

4. 제한효소 104

5. DNA 연결반응 및 대장균 형질전환 106



실험 5-1 ‌플라스미드 DNA 정제: 알칼리 세포용해 방법 107

1. 이론적 배경 107

실험 5-1 흐름도 ‌플라스미드 DNA 정제 – 알칼리 세포 용해 방법 108~109

2. 재료 및 기구 110

3. 실험 과정 110

4. 결과 113

5. 더 알아보기 113

6. 참고사항 113

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 114



실험 5-2 ‌플라스미드 DNA의 정제: 실리카 컬럼 흡착법 115

1. 이론적 배경 115

실험 5-2 흐름도 ‌플라스미드 DNA 정제 ‐ 실리카 컬럼 흡착법 116~117

2. 재료 및 기구 118

3. 실험 과정 118

4. 결과 121

5. 더 알아보기 121

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 121



실험 6 ‌정제한 플라스미드 DNA의 전기영동 확인 및 농도 측정 126

1. 이론적 배경 126

실험 6 흐름도 ‌정제한 플라스미드 DNA의 전기영동 확인 및 농도 측정 128~129

2. 재료 및 기구 130

3. 실험 과정 130

4. 결과 133

5. 더 알아보기 133

6. 참고사항 134

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 134

실험 7 ‌제한효소 절단반응과 DNA 절편의 전기영동 확인 139

1. 이론적 배경 139

실험 7 흐름도 ‌제한효소 절단반응과 DNA 절편의 전기영동 확인 140~141

2. 재료 및 기구 142

3. 실험 과정 142

4. 결과 144

5. 더 알아보기 146

6. 참고사항 146

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 148



실험 8 ‌DNA 연결반응과 대장균 형질전환 154

1. 이론적 배경 154

실험 8 흐름도 ‌DNA 연결반응과 대장균 형질전환 156~157

2. 재료 및 기구 158

3. 실험 과정 158

4. 결과 161

5. 더 알아보기 161

6. 참고사항 161

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 163



실험 8S ‌DNA 절편의 연결반응 후 변화 관찰 169

1. 이론적 배경 169

실험 8S 흐름도 ‌DNA 절편의 연결반응 후 변화 관찰 170

2. 재료 및 기구 171

3. 실험 과정 171



4부 형질전환체 선발 177

실험 9-1 ‌콜로니 PCR에 의한 형질전환체 선발 179

1. 이론적 배경 179

실험 9-1 흐름도 ‌콜로니 PCR에 의한 형질전환체 선발 180~181

2. 재료 및 기구 182

3. 실험 과정 182

4. PCR 산물 확인 184

5. 결과 185

6. 더 알아보기 185

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 185



실험 9-2 ‌복제평판법(replica plating)에 의한 형질전환체 선발 186

1. 이론적 배경 186

실험 9-2 흐름도 ‌복제평판법(replica plating)에 의한 형질전환체 선발 187

2. 재료 및 기구 188

3. 실험 과정 188

4. 결과 190

5. 더 알아보기 190

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 190



실험 10 ‌형질전환체에서 재조합 플라스미드 정제 및 전기영동 확인 195

1. 이론적 배경 195

실험 10 흐름도 ‌형질전환체에서 재조합 플라스미드 분리 및 전기영동 확인 196~197

2. 재료 및 기구 198

3. 실험 과정 198

4. 결과 201

5. 더 알아보기 202

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 202

실험 11 ‌제한효소로 재조합 플라스미드 확인: 제한효소 절단과 전기영동 207

1. 이론적 배경 207

실험 11 흐름도 ‌제한효소로 재조합 플라스미드 확인: 제한효소 절단과 전기영동 208~209

2. 재료 및 기구 210

3. 실험 과정 210

4. 결과 213

5. 더 알아보기 213

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 213



5부 발현 벡터의 유전자 발현 유도와 단백질 산물 확인 219

1. 발현 벡터(expression vector) 220

2. ‌SDS-PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)의 원리와 응용 221



실험 12 ‌유전자 발현유도와 SDS-PAGE 젤 만들기 222

1. 이론적 배경 222

실험 12 흐름도 ‌유전자 발현 유도와 SDS-PAGE 젤 만들기 224~225

2. 재료 및 기구 226

3. 실험 과정 226

4. 결과 230

5. 더 알아보기 230

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 230

실험 13 ‌SDS-PAGE를 이용한 단백질 산물 확인 235

1. 이론적 배경 235

실험 13 흐름도 ‌SDS-PAGE를 이용한 단백질 산물의 확인 236~237

2. 재료 및 도구 238

3. 실험 과정 239

4. 결과 241

5. 더 알아보기 241

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 242



6부 동식물 조직에서 RNA 분리와 유전자 발현 분석 247

1. RNA 분리의 일반적인 사항 248

2. RNase의 오염 및 제거 249

3. 전체 RNA의 분리 방법 249

4. 분리한 RNA를 이용한 유전자 발현 분석 250



실험 14-1 ‌동물조직에서 RNA 분리 및 확인 251

1. 이론적 배경 251

실험 14-1 흐름도 ‌동물조직에서 RNA 분리 및 확인 252~253

2. 재료 및 기구 254

3. 실험 과정 254

4. 결과 256

5. 더 알아보기 256

6. 참고 사항 257

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 258



실험 14-2 ‌식물조직에서 RNA 분리 및 확인 259

1. 이론적 배경 259

실험 14-2 흐름도 ‌식물조직에서 RNA 분리 및 확인 260~261

2. 재료 및 기구 262

3. 실험 과정 262

4. 결과 265

5. 더 알아보기 265

6. 참고 사항 265

7. 참고 문헌 및 웹 사이트 266



실험 14S ‌실리카 컬럼을 이용한 RNA 분리 및 확인 272

1. 실험 과정 272

2. 참고 문헌 및 웹 사이트 273

실험 14S 흐름도 ‌실리카 컬럼을 이용한 RNA 분리와 확인 274~275



실험 15 ‌RT-PCR을 이용한 유전자 발현 분석 276

1. 이론적 배경 276

실험 15 흐름도 ‌RT-PCR을 이용한 유전자 발현 분석 279

2. 재료 및 기구 280

3. 실험 과정 280

4. 결과 288

5. 더 알아보기 288

6. 참고 문헌 및 웹 사이트 289



7부 생물정보학을 이용한 유전자 분석 295

실험 16 ‌생물정보학을 이용한 유전자 염기서열 분석 298

1. 이론적 배경 298

실험 16 흐름도 ‌생물정보학을 이용한 유전자 염기서열 분석 300~301

2. 실험 과정 302

3. 결과 306

4. 더 알아보기 306

5. 참고 문헌 및 웹 사이트 306



부록 pA20 & pK20 sequences 311

pA20 nucleotide sequence (4,097 bp) 312

pK20 nucleotide sequence (4,046 bp) 314



찾아보기 316